产品货号:
WE0507
中文名称:
土壤与粪便DNA提取试剂盒(磁珠法)
英文名称:
Magbead Soil And Stool DNA Kit
产品规格:
96T
发货周期:
1~3天
产品价格:
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本试剂盒提供了一种简单、快速、高效的提取DNA方法,适用于土壤和粪便样本。在高盐存在时,DNA结合于硅基包被的Magbeads表面。漂洗后,高纯度的DNA被洗脱于Buffer EBL或去离子水中。纯化得到的DNA纯度好(A260/280的比值在1.7~1.9之间),完整度高(>15kb),可用于二代测序、定量PCR、芯片检测等下游实验。
组分 | 规格 |
Buffer QSL | 85mL |
Buffer RIL | 20mL |
Buffer ML | 18mL |
Buffer GW1(concentrate) | 80mL |
Buffer GW2(concentrate) | 50mL |
Buffer EBL | 25mL |
Magbeads SN | 2×1mL |
RNase A | 450μL |
Lysis Tubes II | 96个 |
保存:Buffer RIL 2~8℃,其他组分常温。
- 第一次使用前按照试剂瓶标签向Buffer GW1和Buffer GW2中加入无水乙醇并做好标记。
- Magbeads严禁冰冻、离心。冰冻、离心可能会对Magbeads造成不可逆的损害。
- 短暂离心Lysis Tube以使珠子沉淀在底部。
- 向Lysis Tube中加入0.1~0.3g土壤或粪便样本,加入740~820μL Buffer QSL与4μL RNase A,旋紧管盖,短暂涡旋以混合。
- 将Lysis Tube固定在装有2mL适配器的振荡研磨装置中,并根据您的设备使用优
化的研磨条件进行处理(参见附录)。 - 将Lysis Tube在恒温混匀仪上以70℃,1200rpm振荡10min。随后13000rpm离心2min以沉淀固体颗粒。转移540μL上清液至新的2mL离心管。
- 加入180μL Buffer RIL,涡旋5sec,13000rpm离心2min。
- Buffer RIL待即将使用前取出,用完立即放在2~8℃储存。
- 在离心管中依次加入160μL Buffer ML、480μL上清液(来自“样本处理”步骤5)、320μL异丙醇、20μL Magbeads SN,涡旋振荡混匀5sec后将离心管放于25℃、1600rpm的恒温混匀仪上振荡混匀10min。
- Magbeads SN加入前需涡旋振荡20秒使其充分混匀。Magbeads SN可与异丙醇按照上述体积根据样本数量预混然后加入。
- 将离心管放于磁力架上静置1min,待Magbeads完全吸附于离心管侧壁后彻底弃去溶液(保持离心管固定于磁力架上)。
- 将离心管从磁力架上取下,加入750μL Buffer GW1(使用前请检查是否已加入无水乙醇)后涡旋点震1min或涡旋振荡5sec后放于25℃、1600rpm的恒温混匀仪上振荡混匀2min(振荡过程中确保Magbeads处于混匀状态)。之后将离心管放于磁力架上静置1min,待Magbeads完全吸附于离心管侧壁后轻轻颠倒磁力架将离心管盖上的杂质洗落后彻底弃去溶液(保持离心管固定于磁力架上)。
- 重复步骤3。
- 将离心管从磁力架上取下,加入750μL Buffer GW2(使用前请检查是否已加入无水乙醇)后涡旋点震1min或涡旋振荡5秒钟后放于25℃、1600rpm的恒温混匀仪上振荡混匀2min(振荡过程中确保Magbeads处于混匀状态)。之后将离心管放于磁力架上静置1min,待Magbeads完全吸附于离心管侧壁后轻轻颠倒磁力架将离心管盖上的杂质洗落后彻底弃去溶液(保持离心管固定于磁力架上)。
- 重复步骤5。
- 保持离心管固定于磁力架上,用移液器进一步去除离心管管底和管盖上的溶液,之后室温放置5~10分钟,使乙醇挥发干净(肉眼观察磁珠表面变成哑光且磁珠无干裂)。
- 将离心管从磁力架上取下,加入50~200μL Buffer EBL。涡旋振荡使磁珠完全悬浮于洗脱液中后将其放于56℃、1600rpm的恒温混匀仪上振荡洗脱10min,或将离心管放于56℃水浴锅中孵育10min,期间每隔3min涡旋振荡10sec。
- 将离心管放于磁力架上静置2min,待Magbeads完全吸附于离心管侧壁后用移液器将洗脱液转移至新的离心管中-20℃保存备用。
附录1:使用以下方法之一研磨样本:
- 在涡旋振荡仪上以最大速度手动涡旋振荡10min。
- 在搭配有1.5~2mL水平离心管支架的涡旋振荡仪上以最大速度振荡10min(让Lysis Tube保持水平放置)。若样本数量超过12,延长5~10min。
例如使用Scientific Industries或Mobio的Vortex-Genie2涡旋振荡仪。 - 使用Qiagen的TissueLyser II时,以25Hz研磨10min。
- 使用Qiagen的PowerLyzer 24 Homogenizer时,以2000rpm的速度均质化30sec,暂停30sec,然后以2000rpm的速度再次均质化30sec。
- 使用MP Biomedicals的FastPrep-24时,推荐速度为6.0,时间为40sec。
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